این محصول در قالب ورد و قابل ویرایش در 56 صفحه می باشد.
ساخت محلولها :
1- محلولهای بافری:
- محلول بافر A :
این محلول ، بافر تریس بازی با غلظت mM 50 ،8/5=PH می باشد که از محلول استوک آن ،با غلظت mM200 به طریقة زیر تهیه شد:
مقدار g22/24 تریس بازی وزن شد و با ml800 آب مقطر در یک بشر یک لیتری مخلوط شد. PH این محلول با استفاده از محلول Hcl ،37% تا 8/5= pH پائین آورده شد. سپس حجم نهایی توسط آب مقطر به یک لیتر رسانده شد. محلول استوک بدست آمده ، 4 بار رقیق شد تا محلول بافر A حاصل شد.
2-1- محلول بافر B:
این محلول ، بافر تریس بازی با غلظت mM50 ،8/6PH= می باشد که همانند محلول بافر A تهیه شد با این تفاوت که کاهش pH محلول تا 8/6=pH صورت گرفت.
3-1- محلول بافر C:
این محلول ، بافر فسفات سدیم با غلظت mM10،8/6= pH است که از محلول استوک آن با غلظت mM 100به طریقه زیر تهیه گردید:
مقدار g81/35 نمک فسفات دی سدیک و g6/15 نمک فسفات مونوسدیک به همراه ml800 آب مقطر در یک بشر یک لیتری مخلوط شد. سپس pH محلول توسط محلول Hcl، 37% تا 8/6= pH پائین آورده شد و با آب مقطر حجم نهایی محلول به یک لیتر رسانده شد. محلول استوک بدست آمده ، 10 بار رقیق شد تا محلول بافر c بدست آمد.
2- محلولهای االکتروفورز:
1-2- محلول بافر تانک یا الکترود:
این محلول شامل تریس بازی با غلظت M025/0 و گلایسین با غلظت M192/0 ، با 3/8= pH در آزمایشات الکتروفورز بکار گرفته شد. این محلول به حجم یک لیتر به صورت زیر تهیه شد:
مقدار g03/3 تریس بازی و g4/14 گلایسین وزن شده و در یک بشر یک لیتری تا حجم یک لیتر ، آب مقطر به آنها اضافه گردید.
2-2-محلول بافر ژل متراکم کننده (ژل فوقانی):
این محلول با غلظت M5/0 تریس بازی ، 8/6 = pH به طریقة زیر تهیه شد:
مقدار g 1/6 تریس بازی به همراه ml70 آب مقطر در یک بشر مخلوط شد و با کمک محلول Hcl37%، pH آن تا 8/6 کاسته گردید. سپس حجم نهایی محلول با آب مقطر به ml100 رسانده شد.
3-2- محلول بافر ژل جدا کننده (ژل تحتانی):
این محلول با غلظت M5/1 تریس بازی ، 8/8 = pH به طریقة زیر تهیه شد:
مقدار g 2/18 تریس بازی در ml70آب مقطر به حالت محلول درآورده شد و توسط محلول Hcl37% pH آن تا 8/8 کاهش پیدا کرد. سپس حجم نهایی محلول با آب مقطر به ml 100 رسانده شد.
4-2- محلول بافر نمونه (× 5):
حجم ml15 محلول بافر تریس بازی با غلظت 1M، 8/6= pH (g81/1 تریس بازی در ml15 آب مقطر) تهیه شد. به این محلول ml25گلیسرول ، و ml10 آب مقطر افزوده گردید و بخوبی مخلوط شد. به محلول حاصل چند بلور رنگ برموفنل بلو اضافه شد تا محلول به رنگ آبی تیره درآمد.
5-2- محلول آکریل آمید – بیس آکریل آمید:
پودر آکریل آمید و بیس آکریل آمید سمی بوده و باید از استنشاق آنها جلوگیری کرد. جهت تهیه محلول استوک 8/30% از آن با استفاده از دستکش و ماسک ، در زیر هود شیمیایی ،مقدار g30 پودر آکریل آمید و g8/0 پودر بیس آکریل آمید وزن شد و در یک بشر تا حجم ml100 آب مقطر مخلوط گردید. برای حل شدن بهتر مواد فوق در آب مقطر ، بشر در حمام آب گرم قرار داده شد و به کمک همزن مغناطیسی به مدت 30 دقیقه مخلوط شد. سپس محلول بدست آمده توسط کاغذ صافی فیلتر شد و در ظرف تیره رنگی در یخچال نگهداری گردید. محلول فوق خطرناک و نورو توکسیک می باشد و در طی کار آبا آن باید از دستکش استفاده کرد.
6-2- محلول آمونیوم پرسولفات (APS):
جهت تهیة محلول 10 درصد APS، مقدار g1/0 پودر آمونیوم پرسولفات وزن شده و در 1ml آب مقطر حل گردید. این محلول بهتر است تازه تهیه شده و در یخچال نگهداری شود.
3- محلولهای رنگامیزی ژل پلی آکریل آمید:
1-3- محلول رنگامیزی کوماسی بلو G-250:
حجم ml50 محلول رنگامیزی با مخلوط کردن اجزاء زیر تهیه گردید:
ml15 متانل و ml10 اسید استیک گلاسیال با ml25آب مقطر مخلوط شد. به محلول حاصل مقدار g2/0-1/0 رنگ کوماسی بلو G-250 اضافه گردید تا محلول آبی تیره رنگی بدست آمد. این محلول بعنوان محلول ثبوت پروتئینها نیز عمل می کند.
1-1-3- محلول رنگبر:
برای زدودن رنگ از ژل ، به حجم بیشتری محلول رنگبر نسبت به محلول رنگامیزی نیاز است . حجم ml100از این محلول برای رنگبری یک ژل کوچک با ضخامت mm75/0 کافی می باشد. برای تهیة آن ml30 متانل و ml20 اسید استیک با ml50 آب مقطر مخلوط شد و در ظرف درب بسته ای نگهداری گردید.
2-3- محلولهای رنگامیزی نقره :
این محلولها شامل چهارمحلول ، به ترتیب جهت رنگامیزی بکار برده شدند. هر یک از محلولهای رنگامیزی به حجم ml60 تهیه شد که جهت رنگامیزی یک ژل کوچک با ضخامت mm75/0 کافی می باشد. تمامی محلولها برای هر بار رنگامیزی ، تازه تهیه شده و پس از استفاده دور ریخته شدند.
1-2-3- معرف ثبوت:
حجم ml60 محلول استوک استن 50% (V/V) (ml30 استن در ml30 آب مقطر) با حجم ml5/1 محلول استوک تری کلرواستیک اسید (TCA) 50% (V/V) (ml 75/0TCA در ml75/0 آب مقطر ) مخلوط شد. سپس 25 میکرولیتر محلول فرمالدتید 37% اضافه شد.
2-2-3- محلول پیش تیمار II :
حجم 100 میکرولیتر محلول استوک تیوسولفات سدیم 10% (W/V) (g 1/0 تیوسولفات سدیم خشک در 1ml آب مقطر ) با ml60 آب مقطر مخلوط گشت.
-2-3- معرف رنگ:
حجم ml8/0 محلول استوک نیترات نقره 20% (W/V) (g2/0نیترات نقره خشک در ml1 آب مقطره ) و حجم ml6/0 محلول فرمالدئید 37% به ml60 آب مقطر اضافه شده و مخلوط گردید.
4-2-3- معرف ظهور
مقدار g2/1 کربنات سدیم وزن شده و در ml60 آب مقطر حل شد. سپس 25 میکرولیتر محلول فرمالائید 37% و 25 میکرولیتر محلول استوک تیوسولفات سدیم 10% (W/V) (g1/0 تیوسولفات سدیم خشک در ml1 آب مقطر) به محلول فوق اضافه و مخلوط گشت.
4- معرف برادفورد:
جهت تهیه این معرف که به منظور سنجش مقدار پروتئین محلول بکار برده شد، به طریقة زیر عمل گردید:
مقدار mg100 رنگ کوماسی بلو G-250 وزن شده و در ml50 اتانل 95% حل شد. به محلول حاصل ، ml100 ارتوفسفریک اسید 85% اضافه گردید. سپس حجم نهایی محلول با افزودن آب مقطر به یک لیتر رسانده شد. محلول بدست آمده با استفاده از کاغذ صافی فیلتر شده و در ظرف درب داری نگهداری شد.
آماده سازیها:
- آماده سازی ژل سفادکس G-50:
مقاله ساخت محلول ها
